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怎么處理牛血清白蛋白的常見(jiàn)問(wèn)題
2020-03-25
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護(hù)或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對(duì)多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓Ｑ灏椎鞍椎姆磻?yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
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蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白酶K分離自一種可在角質(zhì)上生長(zhǎng)的真菌白色側(cè)齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質(zhì)（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點(diǎn)為帶有封閉氨基基團(tuán)、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對(duì)分子量約為29.3kDa,是一種切割...
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如何提取外泌體？都有哪些方法？
2019-11-26
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載...
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如何解決胎牛血清使用中遇到的問(wèn)題？
2019-11-15
如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。按如下操作可避免沉...
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PicoGreen熒光染料可對(duì)DNA樣品進(jìn)行定量
2019-09-10
PicoGreen熒光染料法是一種靈敏的雙鏈DNA檢測(cè)方式，通過(guò)Modulus檢測(cè)儀可以檢測(cè)到pg級(jí)的微量DNA。這種方法主要用來(lái)測(cè)定微量的DNA殘留，或?qū)NA樣品進(jìn)行定量。作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。PicoGreen技術(shù)可以檢測(cè)到低達(dá)0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號(hào)強(qiáng)度或相對(duì)熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光忽略不計(jì)，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。Picogree...
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擦亮眼睛：選購(gòu)胎牛血清要注意這些問(wèn)題
2019-04-22
市場(chǎng)上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人，難以分辨胎牛血清質(zhì)量的優(yōu)劣。選購(gòu)胎牛血清請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)：一、外觀拿到胎牛血清，先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，...
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外泌體可以來(lái)了解一下
2018-12-07
外泌體的提取主要包括以下幾種方式，一是超速離心法，這是目前外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不...
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EZ ECL Femto化學(xué)發(fā)光液（飛克級(jí)）
2018-11-13
使用方法1)取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘，同時(shí)振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。2)將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時(shí)，同時(shí)振蕩；或在28℃孵育過(guò)夜，不振蕩。3)將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘，更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。注：1）孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率；2）按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。4)將...
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